沉默CD86树突状细胞在异种胰岛混合淋巴细胞培养中的 作用研究

目的探讨沉默CD86 的树突状细胞（DC）在异种胰岛混合淋巴细胞培养中的作用。方法分离培养BALB/c小鼠骨髓来源DC，流式细胞仪鉴定后，以CD86 siRNA转染DC。分离纯化SD大鼠胰岛，吖啶橙（AO）/碘化丙啶（PI）双荧光染色方法检测胰岛细胞活性；提取SD大鼠脾脏淋巴细胞，与经siRNA沉默CD86 的DC混合培养，使DC负载SD大鼠抗原。在400胰岛当量SD大鼠胰岛细胞+1×10⁶个BALB/c小鼠淋巴细胞（对照组1）基础上，混合普通DC（负载SD大鼠抗原）（对照组2）或siRNA沉默CD86 的DC（负载SD大鼠抗原）（实验组）进行体外培养，另以单纯SD大鼠胰岛细胞为空白组，培养3 d后倒置显微镜下检测细胞形态学变化，测定上清液中反映淋巴细胞增殖的细胞因子白介素（IL）-2、IL-4、IL-10及干扰素（IFN）-γ水平，AO/PI染色观察胰岛活性，并行葡萄糖刺激胰岛素释放实验，计算刺激指数。结果培养所得的细胞具有典型的DC形态，流式细胞仪检测DC表面CD11c、CD80、CD86的表达阳性率分别为（86.26±9.73）%、（72.64±8.55）%、（77.18±10.23）%。CD86 siRNA转染DC后CD86沉默。SD大鼠胰岛杂质较少，形态正常，细胞活性>95%。混合细胞培养3 d后，与对照组1、2比较，实验组的IL-10水平升高（P<0.05），IL-4水平相当（P>0.05），IL-2、IFN-γ均降低（P<0.05）,淋巴细胞增殖最少，胰岛功能最好，刺激指数最高。实验组4种细胞因子均高于空白组（P<0.05），刺激指数低于空白组（P<0.05）。结论沉默CD86 的DC负载供体抗原后，与供体胰岛、受体淋巴细胞混合培养，可在一定程度上减轻免疫排斥反应，从而保护供体胰岛功能。

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